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做好ELISA試劑盒保溫工作很重要
瀏覽次數:1150發布日期:2018-08-02

ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應,即加標本和加酶結合物后??乖贵w反應的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育,有人稱之為孵育,在ELISA試劑盒中似不恰當。
ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的結合只在固相表面上發生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結 合的機會,只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗 原的結合也同樣如此。這就是為什么ELISA反應總是需要一定時間的溫育。
溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數抗原抗體結合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應 動力學研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反應一般在37℃經1~2小時,產物的生成可達。為加速反應,可提高反應的溫度,有些試驗在43℃進行,但不宜 采用更高的溫度??乖贵w反應4℃更為徹底,在放射免疫測定中多使反應在冰箱中過夜,以形成多的沉淀。但因所需時間太長,在ELISA試劑盒中一般不予 采用。
保溫的方式除有的ELISA試劑盒儀器附有特制的電熱塊外,一般均采用水浴,可將ELISA試劑盒板置于水浴箱中,ELISA板底應貼著水面,使溫度迅速平 衡。為避免蒸發,板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此時可讓反應板漂浮在水面上。若用保溫箱,ELISA試劑盒應放在濕盒內,濕盒要選用傳 熱性良好的材料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規定的溫度,特別是在氣溫較低的時候更應如此。 無論是水浴還是濕盒溫育,反應板均不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應,操作時的室溫應嚴格限制在規定的范圍內,標準室溫溫度是指 20~25℃,但具體操作時可根據說明書的要求控制溫育。室溫溫育時,ELISA試劑盒只要平置于操作臺上即可。應注意溫育的溫度和時間應按規定力求準 確。為保證這一點,一個人操作時,一次不宜多于兩塊板同時測定。

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